[자연과학][일반화학] Alkaline Phosphatase[AP]의 정제
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작성일 20-04-17 18:58
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1. 實驗(실험)タイトル
- Alkaline Phosphatase(AP)의 정제
2. 實驗(실험)목적
- Ion-exchange chromatography에 의한 단백질 정제 원리를 이해하고, DEAE anion exchange column을 이용한 AP 단백질의 정제기법을 습득하게 된다
3. 實驗(실험)원리
(1) Alkaline Phosphatase(AP)
- Phosphatase는 인산화 되어 있는 분자에서 인산기를 제거하는 효소이다. 대개 생체내의 효소는 특정한 기질과만 反應(반응)하는 기질 특이성을 지니는데, AP같은 경우에는 특정한 기질과만 反應(반응)하지 않는 nonspecific phosphatase에 해당한다. 고정상(stationary phase)은 고체이고, 이동상(mobile phase)는 액체 또는 기체이다. (-)charge를 띠며, 75~85도의 온도에서도 activity를 유지한다. 혼합물에 있는 각 성분(成分)이 두 상과 친화력이 다르면 계를 통과할 때 다른 속도로 움직이며, 그 결과 분리가 일어난다.
(2) Chromatography
- 크로마토그래피는 이동상과 고정상을 이용하여 혼합물을 분리해내는 방법이다.
(3) Column chromatography (관 크로마…(skip)
다. 이동상과 친화력이 큰 성분(成分)은 크로마토그래피를 빨리 통과하지만, 고정상과 친화력이 큰 성분(成分)은 느리게 움직인다. 이름에 alkaline이 붙는 이유는 이 효소가 작용할 수 있는 최적의 environment이 염기성이기 때문이다
AP는 보통 homo-dimer로 작용하며 크기는 140-160 kDa정도이다. 크로마토그래피는 분리 뿐 아니라 물질의 확인 과정에도 매우 유용한데, 어떤 용매가 10cm이동하는 동안 시료 A가 3cm이동하고 B가 5cm이동했다면 같은 용매가 20cm 이동하는 동안 A는 6cm B는 10cm정도 이동할 것이라고 예상할 수 있따 이러한 비율을 계산해 두면 물질 확인에 유용하게 사용할 수 있는데, Rf〓(시료가 이동한 거리) / (용매가 이동한 거리)라는 값을 정이해서 사용한다.
